Cholekalciferol, vzniká v kůži z 7-dehydrocholesterolu v přítomnosti ultrafialového světla štěpením kruhu 3. Vitamin D3 vznikající v kůži nebo absorbovaný z potravy je inaktivní a je pak dále hydroxylován na 1,25-dihydroxyvitamin D3 v játrech a ledvinách.